dilluns, 24 de setembre de 2007

HeLa

Encens la campana i l'esterilitzes amb etanol. A dins hi poses pasteurs de vidre, el pipetus, PBS, medi DMEM suplementat amb glutamina, antibiòtic i sèrum boví, tripsina, flascons. Vas a buscar el teu flascó a l'incubador, i també el poses dintre. Aspires el medi amb una pasteur i amb l'ajuda de la bomba de buit. Afegeixes de 10 a 12 mil·lilitres de PBS. Remous una mica el flascó per extendre bé el PBS. Aspires. Introdueixes 1 ml de tripsina (amb un n'hi ha prou). Vas movent el flascó fins que t'assegures que la tripsina ha cobert tota la monocapa de cèl·lules. Aspires la tripsina. Dones uns copets al flascó per fer que les cèl·lules comencin a desenganxar-se. Apartes el flascó i rotules un nou flascó, o els que calguin, amb la data, el teu nom, el nom de les cèl·lules i el passatge. HeLa p25 XeXu 240907. Reculls el flascó antic i probablement les cèl·lules ja s'estiguin desenganxant. Amb el pipetus i una pipeta de 5 agafes 5 ml de medi i el poses al flascó. Amb la mateixa pipeta agafes 5 ml més i també els poses al flascó. Resuspens bé les cèl·lules (per això la pipeta de 5 va millor), tirant medi per les parets del flascó per acabar de desenganxar les cèl·lules que quedin. Reculls el medi i el fas passar una mica a pressió contra la paret inferior del flascó, perquè els grumolls de cèl·lules es desfacin. Reculls (sense canviar de pipeta) el volum de cèl·lules que vols en funció dels flascons que penses fer i de la dilució que desitges, i ho reparteixes en els flascons. Canvies la pipeta i poses fins a 12 o 13 ml de medi fresc a cada flascó. Els portes a l'incubador. Neteges tot el que queda a la campana, tapant bé les ampolles de medi i el PBS. Guardes cada cosa al seu lloc, esterilitzes la campana amb etanol, i encens els ultraviolats.

7 comentaris:

  1. Xexu, amb quin medi feu creixer les HeLa, que avui (t'ho jur!) he trobat un parell de vials de fa un segle a dins del -80C i vull probar de resucitar-les!!

    ResponElimina
  2. Te l'he posat a dalt, nen. DMEM + 1% glutamina + 1% antibiòtic + 10% sèrum boví.
    L'antibiòtic és una barreja de tres que comprem feta, però cadascú que posi la seva.

    ResponElimina
  3. Quan he vist escrit tripsina m'ha vingut una alegria! Una paraula que conec! Però gràcies al Déu Mr G. he arribat a entendre alguna cosa, diria...

    Això sí, no he trobat què és PBS... O bé em sortien referències a la tele dels EUA (Public Broadcasting Service) o la galena, el sulfur de plom (PbS) :S Així que abans de tornar-me mig boja buscant, ja t'ho pregunto a tu directament :D

    ResponElimina
  4. Laia, busca Phosphate Buffered Saline a la Wiki (en anglès), ho explica força bé.

    Xexu, m'ha encantat, és una mica rotllo Cortázar.

    Frigo, aprovecho pá saludar!

    ResponElimina
  5. - I el seu Genoma digué: creixeu i multiplique-vos mentre hi hagi espai i nutrients!

    I així ho van fer. Varen reproduïr-se i créixer, fins que tot el seu món fora inhabitable.

    ResponElimina
  6. Bé, una darrera instrucció per l'endemà: "Quan arribis a la sala de cultius, assegura't que l'ultraviolat del sostre no està encès". Jo em vaig cremar el clatell tripsinitzant sense haver previst això...

    ResponElimina
  7. Confirmat: quan volguis conservar cel·lules durant un llarg termini, el nitrogen liquid es millor que el -80!

    ResponElimina